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抗人RBC血型B抗原双价小分子抗体基因的构建与表达
特异性活性的双价Fv分子diabody…；而Zhu等将抗人表皮生长因子受体(p185HER2)的mAb和抗CD3的mAb制备成双特异性diabody，可有效地介导淋巴细胞对癌细胞的杀伤作用。这一研究成果为基因工程抗体的研究开辟了新途径，因此，我们采用此种技术路线，可研制产生红细胞凝集的血型din—body抗体。本研究采用五肽接头,[link widoczny dla zalogowanych]，成功地构建了5D12株mAb双价小分子抗体基因。利用PCR技术，在abody基因的5端和3端分别引入适当的酶切位点,[link widoczny dla zalogowanych]，并将其克隆人原核融合载体中表达。本文采用的pGEX．4T一2是一种高效融合蛋白表达载体。其优点是：不但消除了外源基固起始信号ATG周围核苷酸序列对其表达水平的影响，而且以融合形式表达的抗体蛋白降低了对宿主细胞的毒性作用,[link widoczny dla zalogowanych]，有利于目的蛋白的高效表达。同时，表达的GST一5D12diabody融合蛋白可通过亲和层析法纯化,[link widoczny dla zalogowanych]，操作简单易行，所得产品纯度高。此外，在GST与5D12diabody基因的插人部位，有特定的蛋白酶位点(凝血酶或第x固子)，可较简便地切除GST，从而为通过变性复性作用获得具有特异亲和力的双价小分子抗体提供了有利条件,[link widoczny dla zalogowanych]。
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